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一代測(cè)序平臺(tái)

一代測(cè)序儀利用Sanger測(cè)序——雙脫氧末端終止法的原理，將被熒光標(biāo)記的ddNTP摻入到dNTP中，由于ddNTP隨機(jī)摻入，PCR產(chǎn)物從引物之后的第一個(gè)堿基開(kāi)始，每一個(gè)位置都有可能是ddNTP。由于ddNTP缺乏鏈延伸所需要的3'-OH，鏈的延伸就選擇性地在G、A、T或C處終止。這樣的PCR產(chǎn)物與普通PCR不一樣，不能形成一條電泳帶，而是一組長(zhǎng)度相差一個(gè)堿基的成百上千種片段。它們具有共同的起始點(diǎn)，終止在不同的的核苷酸上，每一個(gè)堿基都有相同的概率被終止。將得到的不同大小的片段進(jìn)行毛細(xì)管電泳，通過(guò)對(duì)熒光信號(hào)的采集和拼接，最終獲得目的片段的序列。